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一、使用前準備

1. 選型適配

   
   

   根據目標蛋白分子量選截留分子量（MWCO）合適的超濾管，通常不超過目標蛋白分子量的1/3，如35kDa蛋白可選10kDa截留量超濾管。同時，確認超濾膜材質與樣本化學性質兼容，按樣本體積選容量規(guī)格，確保液面不超管頂標識線。

2. 預處理

   
   

   新超濾管可能含保護劑，需用純水或緩沖液浸泡后離心（1000×g，1分鐘）去除殘留。將其置于4℃冰箱預冷10分鐘，再放冰上預冷2 - 5分鐘，防膜變形或蛋白變性。若不立即使用，用20%乙醇浸泡，保持膜濕潤，避免干裂長菌。

二、操作流程

1. 加樣與平衡

   
   

   倒置離心去除殘留水后，輕柔加樣本，避免劇烈晃動。將超濾管對稱放入離心機轉子，確保質量重心平衡，防離心機震動。

2. 離心參數(shù)

   
   

   根據規(guī)格調整轉速（5000 - 12000×g），離心15 - 40分鐘，如10kDa截留量超濾管常用12000×g離心30分鐘。調低加速度，減少對膜沖擊。離心機預冷至4℃，防蛋白變性。離心后檢查管底有無蛋白沉淀，有則分析調整。

三、樣本收集與后續(xù)

1. 回收濃縮液：用移液槍輕柔吸取或倒置離心回收，避免觸碰膜面。

2. 置換緩沖液：濃縮至1mL后加新緩沖液，重復3次。

3. 清洗保存：一次性超濾管用后丟棄；可重復使用的經純水、乙醇清洗消毒，短期用75%乙醇浸泡，長期用20%乙醇保存。

四、注意事項

控制離心力、正確放置方向防膜破損；預留足夠樣本量防損失；冰上操作、消毒防污染。